| 两种藏药的化学成分和生物活性研究 | |
| 杨云裳 | |
| Subtype | 理学博士 |
| Thesis Advisor | 鲁润华 ; 师彦平 |
| 2004-12-09 | |
| Degree Grantor | 中国科学院研究生院 |
| Department | 中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 |
| Degree Discipline | 分析化学 |
| Keyword | 裸茎金腰 短穗兔耳草 化学成分 生物活性 环糊精 包结作用 相溶解度法 Chrysosplenium Nudicaule Bunge Lagotis Brachystachy Maxim Chemical Constituents Biological Activities Cyclodextrins Inclusion Phase Solubility Method |
| Abstract | 对两种藏药裸茎金腰（Chrysosplenium nudicazlle Bunge）和短穗兔耳草（Lagotis brachystachy Maxim）的化学成分进行了系统研究。经硅胶、聚酰胺、RP-18等层析手段，共分离得到了55个化合物，运用核磁共振波谱等方法，鉴定了40个化合物的结构，其中1个为新化合物，有32个化合物为首次从这两种植物中分离得到。同时，对这两种藏药的质量标准、生物活性等进行了研究。 第一部分 裸茎金腰化学成分研究 从藏药裸茎金腰乙醇提取物中分离得到了18个化合物，鉴定了其中12个化合物的结构，主要为黄酮醇类，均为首次从该植物中分离得到。同时，采用毛细管气相色谱-质谱联用法对该植物的挥发性成分进行了研究，分离出95个峰，共鉴定了其中78种成分。化合物类型以烷烃、烯烃、脂肪酸酯、酮、芳香类和芳香杂环化合物为主。 第二部分 短穗兔耳草化学成分研究 从藏药短穗兔耳草乙醇提取物中分离得到了37个化合物，鉴定了28个化合物的结构，分别为芳香族、萜类、黄酮类化合物。其中1个为新化合物，有20个化合物均为首次从该植物中分离得到。 第三部分 裸茎金腰和短穗兔耳草质量标准研究。 从生药学和有效成分含量测定两方面进行了研究。 裸茎金腰的生药学特征明显，部分显微特征特殊：叶具双螺纹导管、气孔常2-4个紧密排列，种子表皮细胞具细密整齐的角质层纹理。TLC鉴定简单易行。 短穗兔耳草生药学特征明显：叶的构造为不规则等面叶型。气孔轴式为不定式或不等式，各部分的表皮细胞垂周壁显示不同程度的波状结构，化学成分含有萜类、黄酮类等成分，这些特征均符合玄参科的分类学特征。 这些结果为该藏药的生药学研究和开发利用提供科学依据，同时可为其质量标准的制定提供基础。 建立了裸茎金腰中两种黄酮醇5,4′-dihydroxy-3,6,3′-trimethoxy-flavone-7-O-β-D-glucoside（CNB1）、Veronicafolin（CNB2）和β-hydroxyolean-12-en-27-oic acid反相高效液相色谱测定方法。结果显示：CNB1、CNB2和β-hydroxyolean-12-en-27-oic acid分别在84.5μg～507.2μg/mL、36.2μg-216.6μg/mL和0.392-1.176μg/mL有良好线性。回收率分别为99.77％、98.86％和97.24％。RSD分别为1.21％、1.51％和4.27％（ll：5）。药材裸茎金腰中CNBI、CNBZ和β-hydroxyolean-12-en-27-oicacid的含量分别为0.83%、0.18%和0.0058％。该方法灵敏、重复性好，简单可行、结果可靠、可准确定量，从而为藏药裸茎金腰的质量控制提供依据，并为科学评价其药材质量提供有效手段。 第四部分 生物活性实验 抑菌活性 对裸茎金腰和短穗兔耳草的浸膏、挥发油、CNB1及CNB2分别进行了抑菌实验。裸茎金腰挥发油对5种测试菌种（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌、伤寒沙门菌）均有抑制作用，CNB1、CNB2和短穗兔耳草浸膏的抑菌活性也比较明显。 体外抗肿瘤作用 2～32mg/L的CNB1和CNB2对K562细胞的增殖均有抑制作用，抑制作用呈时间-剂量依赖性，与对照组相比，有统计学意义（P＜0.01）。CNB2对K562细胞的增殖抑制作用比CNB1强。药物作用后的K562细胞表现出较为典型的细胞凋亡形态：细胞核固缩，染色质凝集断裂。流式细胞仪分析表明存在G2/M期阻滞，DNA琼脂糖凝胶电泳照片中，用药组则出现了凋亡特有的梯形条带，且CNB2诱导凋亡作用要好于CNB1。基因表达分析显示药物作用后p53表达无明显变化，Bcl-2表达下调，Fas表达上调。可见，CNB1和CNB2对K562细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用。其诱导凋亡可能与下调Bcl-2和上调Fas有关。 对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用 短穗兔耳草中单体化合物Luteolin（LBM13），Luteolin-7-O-β-glucoside（LBM14）和Chrysoeriol（LBM15）对H2O2诱导PCl2细胞的损伤有保护作用。经神经细胞培养证明，这三种化合物能显著地诱导H2O2损伤的PCl2细胞的轴突生长，都能够明显减轻H2O2处理后损伤细胞形态的变化，抑制和延缓凋亡的发生。各用药组可以减轻H2O2引起的细胞凋亡，改善细胞形态。用药后，各用药组明显提高了细胞的存活率。LBM13抑制H2O2模拟的自由基损伤的作用最强。LBM15和LBM14抑制H2O2模拟的自由基损伤的作用相近。 第五部分 环糊精对黄酮化合物的增溶及包结作用研究 相溶解度法研究表明：HP-β-CD对CNB2增溶明显，包结平衡常数Kf＝4.5×104L/mol，而β-CD反而引起其水溶性的下降：β-CD时CNB1增溶明显，包结平衡常数Kf＝467.27L/mol。为了进一步探讨包结物的形成及性质，分别采用核磁共振氢谱、X-射线衍射、红外光谱、热分析等方法对环糊精与CNB1和CNB2包结体系进行了研究。 |
| Subject Area | 天然药物化学 |
| Document Type | 学位论文 |
| Identifier | http://ir.licp.cn/handle/362003/5431 |
| Collection | 中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 杨云裳. 两种藏药的化学成分和生物活性研究[D]. 中国科学院研究生院,2004. |
| Files in This Item: | ||||||
| File Name/Size | DocType | Version | Access | License | ||
| 杨云裳.pdf（24255KB） | 开放获取 | CC BY-NC-SA | View Application Full Text | |||
Items in the repository are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.
Edit Comment