| 甲烷单加氧酶的理化性质与分子生物学研究 | |
华绍烽
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| Subtype | 理学博士 |
| Thesis Advisor | 李树本 |
| 2006-12-06 | |
| Degree Grantor | 中国科学院研究生院 |
| Department | OSSO国家重点实验室 |
| Degree Discipline | 物理化学（含：化学物理） |
| Abstract | 本论文探索了甲烷氧化菌的生长特性及不同添加剂和培养环境对细胞生长的影响。对羟基化酶进行了分离纯化和表征，测定了Methylosinus trichosporium IMV 3011和 Methylomonas sp.GYJ3的甲烷单加氧酶基因组序列及16S rDNA序列，并进行了生物信息学分析。以菌株GYJ3为背景，利用共表达载体pETDuet™-1，pCDFDuet™-1，pRSFDuet™-1对溶解性甲烷单加氧酶进行了克隆与表达，取得了以下成果：（1）2µM Cu2＋，0.02% 甲醇，0.01MPa压力能够促进甲烷氧化菌生长。（2）菌株IMV 3011中羟基化酶分子量为201.3 KDa，由三个亚基（αβγ）组成，分子量分别为58 KDa、36 KDa和23 KDa，呈现同型二聚体构型(αβγ)2。该酶的等电点为5.2，比活力为603.6 nmol/min/mg，每分子酶中含有3.02个Fe原子。羟基化酶分子结构以α螺旋为主。稳定性pH值为6.2－7.5，稳定性温度为低于35℃。（3）菌株 IMV 3011中溶解性甲烷单加氧酶基因全长为5319 bp，16S rDNA的长度为1290 bp，与Methylosinus trichosporium OB3b进化关系最近，相应基因的同一性是99.0％－82.7％，羟基化酶α亚基氨基酸序列的同一性是99.4%－81.8%。（4）菌株GYJ3中溶解性甲烷单加氧酶基因全长为5690bp，16S rDNA序列为1280bp。与已报道的甲烷单加氧酶羟基化酶α亚基的氨基酸序列同一性是78％－99％，基因序列同一性是71％－97％。最近似的菌株是Methylomonas sp.KSWIII。（5）对菌株GYJ3中溶解性甲烷单加氧酶基因组进行了分子克隆，部分组分已在E.coli中成功表达。 |
| Subject Area | 酶催化 |
| Funding Project | 环境催化与清洁能源研究组 |
| Document Type | 学位论文 |
| Identifier | http://ir.licp.cn/handle/362003/3094 |
| Collection | 羰基合成与选择氧化国家重点实验室（OSSO） |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 华绍烽. 甲烷单加氧酶的理化性质与分子生物学研究[D]. 中国科学院研究生院,2006. |
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| 200633华绍烽.PDF（4091KB） | 开放获取 | CC BY-NC-SA | View Application Full Text | |||
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