| 固定化脂肪酶的构建及酶抑制剂的筛选 | |
| 刘佳 | |
| Thesis Advisor | 师彦平 ; 张樱山 |
| 2020-05-24 | |
| Degree Grantor | 中国科学院大学 |
| Place of Conferral | 北京 |
| Degree Name | 工程硕士 |
| Degree Discipline | 制药工程 |
| Keyword | 固定化载体 固定化脂肪酶 脂肪酶抑制剂筛选 肥胖症 天然药物 |
| Abstract | 随着治疗肥胖症的创新药物研发的需求，从天然药物中筛选脂肪酶抑制剂已成为发现治疗肥胖药物的重要途径。脂肪酶抑制剂通过抑制脂肪酶的活性，阻止了脂肪酶将膳食脂肪（以甘油三酸酯的形式）水解为可吸收的游离脂肪酸和甘油，进而达到减肥的目的。因在极端pH和温度条件下具有出色的可重复使用性和稳定性，固定化酶已被用作脂肪酶抑制剂筛选的理想策略。毛细管电泳因其样品消耗量少、自动化强度高、分离效率高等优点而被作为酶抑制剂筛选的重要分析手段。为此,本论文以肥胖症的治疗靶标脂肪酶为研究对象，以磁性纳米粒子为酶固定化载体，制备了固定化酶，并结合毛细管电泳技术，构建了固定化酶微反应器用于酶促反应动力学和抑制反应动力学系统评价及酶抑制剂的快速筛选。主要研究内容如下： （1）首先，通过溶剂热法制备Fe3O4@TiO2纳米粒子，并用作磁性载体，通过静电相互作用固定化脂肪酶。通过透射电子显微镜，傅立叶变换红外光谱和X射线衍射等技术，对磁性纳米粒子进行了表征。与游离酶相比较，固定化酶具有pH值和温度耐受性范围更广，储存稳定性更好和可重复使用的优点。其次以对硝基苯棕榈酸酯作为酶催化底物，利用产物对硝基苯酚在405 nm处的特征紫外吸收进行检测，对固定化脂肪酶的酶促反应动力学进行了评价。以奥利司他为模型抑制剂进行酶抑制动力学研究。最后将所建立的方法用于从6种藏药中进行脂肪酶抑制剂的筛选，结果镰形棘豆具有优异的脂肪酶抑制活性，同时对镰形棘豆中的11种化合物进行了筛选，其中5种化合物具有与临床上最常用于治疗肥胖症的药物奥利司他相似的抑制活性，而且化合物山奈酚的抑制活性优于奥利司他。本科研工作不仅构建了发现治疗肥胖药的一种新方法，而且为探索藏药的用途提供了启示。（2）通过物理吸附方式固定化脂肪酶在使用过程中易从载体中流失，为了避免脂肪酶分子从载体渗出，本研究工作首先构建了氨基磁性纤维素微球固定化脂肪酶的制备，即利用共价结合的方法，以戊二醛为交联剂将脂肪酶固定于氨基磁性纤维素微球上，实现了脂肪酶的键合固定。其次通过对制备的材料进行TEM和FT-IR表征，也进一步的证明了载体的成功制备。 |
| MOST Discipline Catalogue | 工学 |
| Pages | 63页 |
| Language | 中文 |
| Document Type | 学位论文 |
| Identifier | http://ir.licp.cn/handle/362003/27372 |
| Collection | 中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 |
| Affiliation | 1.中国科学院兰州化学物理研究所; 2.中国科学院大学 |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 刘佳. 固定化脂肪酶的构建及酶抑制剂的筛选[D]. 北京. 中国科学院大学,2020. |
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| 202046刘佳.pdf（4054KB） | 学位论文 | 开放获取 | CC BY-NC-SA | View Application Full Text | ||
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