| 中药枸杞分析方法与抗氧化活性研究 | |
| Alternative Title | 无 |
| 张弦飞 | |
| Thesis Advisor | 师彦平 ; 张海霞 |
| 2018-05-21 | |
| Degree Grantor | 中国科学院大学 |
| Place of Conferral | 北京 |
| Degree Name | 理学博士 |
| Degree Discipline | 分析化学 |
| Keyword | 枸杞 甜菜碱 抗氧化活性 指纹图谱 谱效关联 Lycii Fructus Betaine Antioxidant activity Chromatographic fingerprint Spectrum-effect relationship |
| Abstract | 枸杞为茄科Solanaceae枸杞属Lycium植物宁夏枸杞LyciumbarbarumL.的干燥成熟果实，是一种传统的中药材和广泛应用的功能食品，具有滋补肝肾，益精明目的功效。枸杞年产量约250,000吨，栽培历史悠久，主要产区有宁夏、甘肃、青海、新疆、河北、内蒙古。不同产地与生长条件下，枸杞的化学成分和生物特性不同。且其化合物种类多，活性成分及成分间相互作用的机制不明，这限制了枸杞的应用与开发。因此，为加强枸杞的质量评价，研究抗氧化活性成分，建立枸杞的色谱指纹图谱，确立谱效关系，促进枸杞资源的高值化开发与利用，本论文从以下五方面进行了研究： 1.枸杞中甜菜碱的分离分析 基于超高效合相色谱-质谱（UPC2-MS），开发了一种分离分析枸杞中甜菜碱（唯一指标化合物）的新方法。采用ACQUITYUPC2BEH2-EP色谱柱（2.1×50mm，I.D.1.7μm），以0.7mL/min超临界CO2-甲醇等度洗脱，枸杞中的甜菜碱被成功分离。在该分离过程中，0.1%甲酸作为改性剂；背压为1.31×107Pa；柱温为40℃；进样体积为1μL；保留时间为3min。在上述条件下，所得线性回归方程的相关系数为0.9992，检测范围为0.5～50μg/ml。随后，通过对精密度、重复性、稳定性和加样回收率（平均值96.3%）的分析，验证了该方法的有效性。最后，所建立的方法被成功应用于11批样品的质量分析与评价。 2.基于UPLC-MS/MS-ABTS法快速筛选并鉴定枸杞中抗氧化活性成分 枸杞富含天然抗氧化成分。采用超高效液相色谱-质谱-ABTS（UPLC-MS/MS-ABTS）法，快速筛选并初步鉴定了枸杞中抗氧化活性成分。枸杞中含有的抗氧化活性成分，可与ABTS•+发生氧化还原反应，反应后相应成分的UPLC峰的面积会减小或消失。应用这一机制，通过向枸杞乙醇提取液中添加ABTS•+，对比添加前后的色谱图，可快速区分抗氧化活性UPLC峰。实验结果表明，与清除ABTS•+活性关联最密切的峰为P3、P8、P9，结合MS/MS数据分析，P3、P9被初步鉴定为绿原酸和芦丁。方法学考察表明，所建立的方法精密度高、稳定性好、重现性好。综上所述，该方法可用于枸杞及其它中药的抗氧化活性成分的快速筛查。 3.不同产地枸杞的抗氧化能力评价 测定并分析评价了30批不同产地枸杞的抗氧化活性。枸杞经乙醇回流提取，其浸膏通过大孔树脂吸附富集后，由超纯水和30%、60%、90%乙醇依次洗脱得到不同的提取组分，或直接由乙醇提取得总提取组分。随后，各提取组分被真空冷冻干燥，分别稀释至1、25、50、75和100μg/mL后，用于抗氧化能力评价。采用DPPH法和ABTS法，上述组分的抗氧化活性测试结果表明，60%乙醇洗脱物的清除自由基能力最佳。最后，采用60%乙醇洗脱组分，由DPPH法和ABTS法测定了30批不同产地枸杞的抗氧化活性（半数清除浓度，IC50值），并进行了聚类分析。IC50值分别为14.73～85.12μg/mL（DPPH法）和11.18～32.66μg/mL（ABTS法）。聚类分析表明宁夏和甘肃枸杞的抗氧化活性较优。 4.枸杞色谱指纹图谱的建立 采用UPLC-MS/MS建立了30批枸杞药材的色谱指纹图谱；采用化学计量统计学方法，包括相似性分析（SA）、聚类分析（HCA）和主成分分析（PCA），完成了30批枸杞药材的全分析，获得了枸杞的标准色谱指纹图谱。其中，SA分析确定了30个共有峰，其相似度在90%以上，可全面地体现各不同枸杞样品的化学特性；HCA和PCA分析均将30批枸杞分为了三大类，分析还表明枸杞样品的聚类与其栽培和野生密切相关。色谱指纹图谱的建立为枸杞药材的质量评价与控制提供了全面、客观的数据支持，为后续的谱效相关研究奠定了基础。 5.枸杞抗氧化活性成分的谱效关联研究与成分鉴定 采用偏最小二乘法（PLS），以30个UPLC共有峰为自变量，以30批枸杞样品清除DPPH•和ABTS•+的IC50值为因变量，确定了9个抗氧化活性显著的UPLC峰（P14>P26>P21>P8>P17>P2>P29>P30>P11）。尤其是峰P14、P21和P26，回归系数值较大，抗氧化活性较强。进一步对这些UPLC峰进行质谱分析，P14、P19、P21和P30分别被鉴定为绿原酸、槲皮素、山萘酚、异鼠李素。最后，通过与对照品的保留时间、紫外吸收光谱和质谱裂解峰进行比对，以及参考相关文献，结果得到了确认。 |
| Other Abstract | 无 |
| Document Type | 学位论文 |
| Identifier | http://ir.licp.cn/handle/362003/26332 |
| Collection | 中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室 中国科学院兰州化学物理研究所 |
| Affiliation | 1.中国科学院兰州化学物理研究所; 2.中国科学院大学 |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 张弦飞. 中药枸杞分析方法与抗氧化活性研究[D]. 北京. 中国科学院大学,2018. |
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