蜂蜜与双黄连的毛细管电泳分析方法研究
周贤婧1,2
Subtype理学博士
Thesis Advisor师彦平
2015-11-19
Degree Grantor中国科学院大学
Place of Conferral北京
Department中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室
Degree Discipline分析化学
Keyword毛细管电泳 蜂蜜 中草药 氨基酸 质量控制 Capillary Electrophoresis Honey Traditional Chinese Medicines Amino Acids Quality Control
Abstract

毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)是近二十年来发展最快的一种分离分析技术,具有分离效率高、所需样品量少、分析成本低等优点,其应用研究涉及药物分析、食品分析、生化分析等几乎所有的分析领域。基于此,本文展开了一系列毛细管电泳在蜂蜜和药品中的应用研究,工作内容主要涉及以下几个方面:

1. 论文首先介绍了蜂蜜成分的研究进展、毛细管电泳的发展历史、基本原理、分离模式及其检测联用技术的研究进展。综述了近几年来毛细管电泳技术在离子分析、小分子分析、食品、环境监测、生命科学和药物分析领域中的应用,并在此基础上阐述了本论文的研究内容和意义。

2. 采用毛细管电泳间接紫外检测法同时分离测定赖氨酸、色氨酸、谷氨酸等9 种氨基酸。考察了磷酸浓度、进样方式和缓冲液pH对分离效率和重现性的影响。9种组分在11 min 内达到基线分离。检出限最低可达到0.3 µg mL-1。日间精密度及日内精密度均小于3.22%。加标回收率为80.11%-110.2%。该方法应用于不同蜜源植物和产地的蜂蜜样品的测定,在市售的五种蜂蜜中均检测到脯氨酸、色氨酸和天冬氨酸的存在,而只在荔枝蜜中检测到苏氨酸,游离氨基酸主要以脯氨酸为主。

3. 采用高效毛细管电泳法配以二极管阵列检测器测定了5种不同蜜源植物的蜂蜜中山奈素、芹菜素、木犀草素和阿魏酸的含量。四个化合物日内和日间精度的分别低于0.92%和2.51%。该方法的回收率在91.00%-101.82%范围内。多酚含量最大可达27.58 mg kg-1。此外还考察了蜂蜜中多酚含量和自由基清除能力之间的关系,证明不同品种的蜂蜜,抗氧化能力有很大差异。

4. 采用毛细管电泳对不同产地的油菜花蜂蜜指纹图谱进行比较,应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件对油菜花蜂蜜黄酮类成分CE指纹图谱进行分析评价。结果得到10个稳定的共有峰。与甘肃产洋槐蜜图谱相比较,进一步确定了所得8个共有峰是油菜蜜特有的指纹图谱峰,因此借助蜂蜜中微量特征成分分析来控制蜂蜜质量是可行的。该方法具有重现性好,特征性强,快速等特点,能够客观反映油菜花蜂蜜的指纹特征,可以成为油菜花蜂蜜质量评价及控制的表征指标。

5. 蜂蜜在贮存和热加工过程中,由于糖分的分解和转化,5-羟甲基糠醛逐渐产生。因此,5-羟甲基糠醛含量的多少是反映蜂蜜新鲜程度及加工处理技术水平的重要指标。论文利用毛细管电泳建立一种快速和简单的胶束电动色谱方法测定蜂蜜中5-羟甲基糠醛,并考察了热加工过程中温度和时间对其含量的影响。对影响分离的缓冲、表面活性剂浓度和pH值等参数进行了研究和优化。该方法检测限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为 0.702 μM和2.73 μM。日间、日内精密度RSD在1.02-2.33%之间。蜂蜜样品中5-HMF的含量随着温度的增加而逐渐增加。加热温度、加热时间和蜂蜜的pH值与5-羟甲基糠醛含量显示良好的相关性,这可以为蜂蜜质量的快速评估提供强有力的指导。

6. 以铜(II)离子作为中心离子螯合氨基酸,形成在紫外233 nm 处有较强吸收的络合物,建立扫集毛细管电泳富集方法检测血清中的铜(II)离子氨基酸络合物,减少复杂的衍生化过程。这种方法分离实际样品中的10个氨基酸可在21分钟内达到基线完全分离,检测限为0.05 μg mL-1,完全可以达到检测血清中氨基酸的浓度。该方法简单、快速,并具有较高的准确性和可靠性,可以直接应用于检测人血浆和口服液中氨基酸。此外,扫集大体积进样技术和络合作用结合可以大大提高检测灵敏度。

7. 根据课题组提出的一种新的药物评价策略-中成药多成分的整体分析评价,建立一个简单而可靠的分析方法,用于对中药双黄连口服液和双黄连软胶囊的质量评价。实验以对羟基苯甲酸作为内标,选择了七种主要成分黄芩素、黄芩苷、绿原酸、汉黄芩素、黄岑素、连翘苷和金丝桃苷做为胶束电动色谱分析的评价指标。该方法检测限为0.15-2.05 μg mL-1,回收率为89.00%-103.04%。该方法已成功应用于中药双黄连复方制剂的质量控制。

Subject Area分离与分析科学
Funding Project药物化学成分研究组
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.licp.cn/handle/362003/20824
Collection中科院西北特色植物资源化学重点实验室/甘肃省天然药物重点实验室
Affiliation1.中国科学院兰州化学物理研究所
2.中国科学院大学
First Author AffilicationLanzhou Institute of Chemical Physics,Chinese Academy of Sciences
Recommended Citation
GB/T 7714
周贤婧. 蜂蜜与双黄连的毛细管电泳分析方法研究[D]. 北京. 中国科学院大学,2015.
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